當樣本值較低接近試劑盒的靈敏度就容易發生樣本值低于空白值的現象，特別是在血清和血漿樣本的檢測。elisa試劑盒技術專家對此現象的原因分析有兩個方面，一是基質效應、二是實驗誤差。 一、基質(zhi)效應
分(fen)(fen)析中，基(ji)(ji)質指的(de)(de)是樣本中被分(fen)(fen)析物之外的(de)(de)組分(fen)(fen)，基(ji)(ji)質常(chang)常(chang)對(dui)分(fen)(fen)析物的(de)(de)分(fen)(fen)析過(guo)程有顯著的(de)(de)干擾，并影(ying)響(xiang)分(fen)(fen)析結果(guo)的(de)(de)準(zhun)(zhun)確性，這(zhe)些影(ying)響(xiang)和干擾被稱為基(ji)(ji)質效(xiao)應。ELISA試(shi)劑盒(he)在開發(fa)過(guo)程中，標準(zhun)(zhun)品不(bu)能采用人或(huo)動物血清、血漿作為標準(zhun)(zhun)曲線的(de)(de)稀(xi)釋(shi)液(ye)，只能采用其模擬(ni)物。模擬(ni)物與(yu)被測樣本在蛋(dan)白(bai)豐度、復(fu)雜(za)性、pH等(deng)因素都會存在差(cha)異(yi)。當樣本的(de)(de)基(ji)(ji)質與(yu)其模擬(ni)物相比，降低抗原抗體(ti)的(de)(de)結合(he)，便產生了樣本值(zhi)低于(yu)空(kong)白(bai)值(zhi)的(de)(de)現(xian)象。造成(cheng)樣本值(zhi)無法計(ji)算出數(shu)值(zhi)，或(huo)者(zhe)數(shu)值(zhi)為負。
目前常(chang)用(yong)的去除基質(zhi)效(xiao)應(ying)的方(fang)法(fa)是(shi)，通(tong)過已知(zhi)分析物濃度的標(biao)準(zhun)樣(yang)品(pin)，同時盡(jin)可能保持樣(yang)本中的基質(zhi)不變，建立一個校正曲線。
當(dang)單個樣本或少量樣本值(zhi)低于(yu)空(kong)白值(zhi)時(shi)，可(ke)能是誤差原(yuan)因，這時(shi)應(ying)增加(jia)重復，提(ti)高操作技能。當(dang)大量樣本都(dou)低于(yu)空(kong)白值(zhi)時(shi)，應(ying)考慮基質(zhi)效應(ying)的(de)影響，建立校正(zheng)曲線予以修正(zheng)。
二、實驗誤差
誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)分為三(san)類，系統誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)、隨機(ji)誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)和(he)過(guo)失誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)。這三(san)類誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)中，系統誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)對樣(yang)本(ben)值(zhi)和(he)空白值(zhi)之間的差(cha)(cha)異無(wu)影響。ELISA樣(yang)本(ben)值(zhi)低于空白值(zhi)在誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)方面主要來(lai)源于隨機(ji)誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)和(he)過(guo)失誤(wu)(wu)(wu)(wu)差(cha)(cha)。
1.隨機(ji)誤差 Random Error
無(wu)法控(kong)制的(de)(de)(de)變(bian)因，使測量值(zhi)產生(sheng)隨(sui)機分布(bu)的(de)(de)(de)誤(wu)(wu)(wu)差，服從(cong)統計學上的(de)(de)(de)正態分布(bu)。從(cong)統計學上來看(kan)，測量值(zhi)有(you)(you)99%的(de)(de)(de)置信限在±3SD之間，如(ru)果CV值(zhi)是20%，隨(sui)機誤(wu)(wu)(wu)差的(de)(de)(de)邊界就(jiu)是±60%，也就(jiu)是說在CV值(zhi)20%的(de)(de)(de)狀況下，樣本值(zhi)低于空白值(zhi)60%之內，有(you)(you)可能是隨(sui)機誤(wu)(wu)(wu)差的(de)(de)(de)影(ying)響，特別是空白值(zhi)只有(you)(you)一個(ge)值(zhi)時。
隨(sui)機(ji)誤(wu)差不(bu)可(ke)消(xiao)除，只能通過多次(ci)測量(liang)(liang)獲得的均值(zhi)(zhi)盡量(liang)(liang)逼近(jin)(jin)真值(zhi)(zhi)。降(jiang)低隨(sui)機(ji)誤(wu)差的解決方案1是增加空(kong)白值(zhi)(zhi)的重復(fu)數量(liang)(liang)，一般(ban)認(ren)為(wei)空(kong)白值(zhi)(zhi)重復(fu)10次(ci)，測量(liang)(liang)均值(zhi)(zhi)接近(jin)(jin)真值(zhi)(zhi)。
方案2是(shi)提高(gao)實驗技(ji)能(neng)，也能(neng)夠有(you)效降低隨(sui)機誤差的影響。如果CV值(zhi)在(zai)5%，樣本值(zhi)趨近于零(ling)時，在(zai)統計(ji)上(shang)樣本值(zhi)將不會(hui)低于空白值(zhi)15%。
2.過失誤差Gross Error
主要是(shi)由于測量(liang)者的(de)疏忽，犯了不應有的(de)錯誤(wu)造成的(de)。過失(shi)誤(wu)差是(shi)可以避免(mian)的(de)。針對于ELISA樣(yang)(yang)本值(zhi)低于空白(bai)(bai)值(zhi)的(de)問題，過失(shi)誤(wu)差產生的(de)原因多數來源于空白(bai)(bai)孔HRP的(de)重復(fu)(fu)加樣(yang)(yang)或污染或洗滌不干凈(jing)，造成空白(bai)(bai)值(zhi)偏高，相(xiang)對比來說，樣(yang)(yang)本值(zhi)低于空白(bai)(bai)值(zhi)。解決方案就是(shi)重復(fu)(fu)實(shi)驗，規范操作(zuo)。
